全球快播：達安科普：詳解新冠核酸快速檢測PCR技術的三代不同！

(資料圖片)

新冠疫情以來，新冠核酸快速檢測技術逐漸走進了人們的視野中， 人們對于新冠核酸快速檢測的認識也越來越多。 新冠核酸快速檢測是屬于分子診斷的技術中的一種，它是通過DNA復制的特性，在體外對于某段特定的核酸片段進行指數級的復制，將少量的核酸大量復制，通過復制過程中與標記了熒光探針的信號片段結合，并使得熒光化合物脫落發出熒光信號的有無、強弱來判斷是否感染該病毒。

但是分子診斷中除了核酸檢測以外，還有有非常多的技術都是針對基因水平進行檢測的。 今天我們一起來看一下這其中一種創新的檢測技術——數字PCR。那都是PCR技術它們有什么不一樣呢？

PCR技術，按照PCR技術的演進，人們習慣性的將PCR技術劃分為三代：普通PCR技術，實時熒光定量PCR技術和數字PCR技術。

熒光PCR目前有兩種比較常見的方法，一是熒光染料法，二是熒光探針法。 熒光染料法是通過DNA結合染料，與雙鏈DNA非特異性結合，在游離的狀態下，DNA結合染料會發出微弱的熒光， 但是與雙鏈DNA一旦結合，它的熒光信號就會增加1000倍。 利用這種特性就能判斷或真產物的量。 但是由于染料是與DNA的非特異性結合，所以可能會產生假陽性的結果。 而熒光探針法則是在PCR擴增的時候加入一對引物的，同時再加入一個特異性的熒光探針，熒光探針的兩端標記一個熒光報告基團和一個熒光猝滅基團，當特異性片段在擴增時。 Ta q酶的酶活性就會將探針的酶切降解，然后報告熒光信號，在沒擴增一條DNA鏈，就會形成一個熒光分子，使得熒光信號與PCR產物形成同步，新冠核酸檢測就是通過這個方法進行的。

數字PCR是一種核酸分子絕對定量技術。相較于qPCR，數字PCR能夠直接讀出DNA/RNA分子的個數，是對起始樣品核酸分子的絕對定量。數字PCR是把反應體系均勻分配到大量反應單元中，根據“泊松分布”原理，每個反應單元中不包含或包含一個到多個目的核酸序列。然后在每個反應單元中獨立地進行PCR擴增，目標分子被擴增后會產生熒光信號，反應結束后將有信號的反應單元計為陽性；而不含目標分子的產物，不會發生PCR擴增，則計為陰性。

最后通過“泊松分布”和熒光信號陽性的反應單元占所有反應單元的比例計算出樣本中目標核酸分子的拷貝數，從而實現絕對定量檢測。

目前新冠核酸快速檢測仍然使用的是熒光PCR技術，因為熒光探針法是目前相對經濟且便利的方法，相信通過技術的不斷發展，PCR技術仍會有不同程度的提升！

標簽： 熒光探針 熒光染料